Phương pháp phenol-sulfuric acid là một phương pháp so màu nhanh và đơn giản, dùng để xác định tổng các loại carbohydrate có trong mẫu. Phương pháp này phát hiện được gần như tất cả các loại carbohydrate, bao gồm mono-, di-, oligo- và polysaccharide. Tuy nhiên, độ hấp thụ của các carbohydrate khác nhau thì không giống nhau. Do đó, trừ khi đã biết trước trong mẫu chỉ chứa một loại carbohydrate, kết quả định lượng phải được biểu diễn theo một loại carbohydrate nào đó.
Trong phương pháp này, acid sulfuric đậm đặc sẽ thủy phân tất cả polysaccharide, oligosaccharide và disaccharide thành các monosaccharide. Các pentose (carbohydrate chứa 5 carbon) sau đó sẽ bị loại nước thành furfural, còn các hexose (carbohydrate chứa 6 carbon) thì thành hydroxymethyl furfural. Các hợp chất này sau đó sẽ phản ứng với phenol thành một sản phẩm có màu vàng. Với những mẫu thực phẩm có hàm lượng xylose (một loại pentose) cao như dùng cám lúa mì thì người ta dùng xylose để dựng đường chuẩn, và đo độ hấp thụ ở 480 nm. Với những mẫu có hàm lượng các hexose cao, người ta thường dùng glucose để dựng đường chuẩn, và đo độ hấp thụ ở 490 nm. Màu của sản phẩm phản ứng này bền trong vài giờ, và nếu thực hiện thí nghiệm hợp lý thì độ đúng của kết quả đạt 98%-100 %.
Các carbohydrate là nguồn cung cấp năng lượng chính trong các loại nước ngọt, bia, nước trái cây, với khoảng 4 Cal/g carbohydrate. Trong thí nghiệm này, chúng ta sẽ tạo một đường hấp thụ chuẩn với dung dịch glucose chuẩn, sau đó dùng nó để xác định hàm lượng carbohydrate của các loại nước giải khát rồi từ đó tính lượng calorie của chúng.
Nguyên tắc của phương pháp: các carbohydrate (các loại đường đơn và đường đa và dẫn xuất của chúng) khi có mặt acid mạnh sẽ phản ứng, sinh nhiệt làm nóng dung dịch và sinh ra các dẫn xuất furfural. Các dẫn xuất này sẽ cộng hợp với phenol sinh ra các hợp chất có màu vàng, và có thể đo được bằng phương pháp quang phổ.
Các lưu ý về an toàn:
Phải THẬT CẨN THẬN khi làm việc với H2SO4 đặc và dung dịch phenol 80%. Phải đeo găng tay và kính bảo vệ mắt, thao tác phải nhẹ nhàng, cẩn thận. Acid sulfuric đặc ăn mòn rất mạnh với da, quần áo, giày dép … Phenol là một chất độc nên khi thí nghiệm xong không được đổ vào bồn nước mà phải đổ vào thùng đựng riêng đối với chất độc.
Thiết bị
- Máy đo quang phổ UV-VIS
- Máy lắc ống nghiệm (Vortex)
- Bể điều nhiệt, giữ ở nhiệt độ phòng.
Quy trình thí nghiệm
- Khử khí CO2 khỏi các mẫu nước
- Pha loãng 500 lần mẫu thực phẩm đã khử CO2
- Phản ứng với H2SO4 và phenol
- Đo độ hấp thụ
Để xác định độ hấp thụ hay độ truyền qua, máy đo quang phổ của BIOBASE có thể thử nghiệm mẫu ở quy mô siêu nhỏ, tối thiểu 0,5 ul. Nền tảng kép Ultromicro và cuvette (Chỉ dành cho BK-CW2000). Khu vực thử nghiệm rộng, gấp 100 lần so với máy quang phổ truyền thống. Hầu hết các mẫu không cần pha loãng. Kiểm tra trực tiếp mà không cần hâm nóng, không cần bình chứa, mức tiêu thụ hàng ngày thấp hơn. Điều khiển PC, chính xác và linh hoạt hơn.
